XPJ细胞培养指南

培养条件

对于细胞的培养，环境条件至关重要。气相建议为95%空气与5%二氧化碳，温度设定在37℃。

传代方法

首次传代建议采取1:2的比例进行。细胞传代后需要注意观察情况，在两天后更换培养液。建议同时购买XPJ的培养基，这样能享受到更优质的折扣。

收到细胞后，应将其处理至良好状态，随后填充完全培养液并封紧瓶口，这是运输细胞的最佳方式。首先，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以保证细胞状态稳定。之后，使用显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数（最好为40x、100x和200x）拍照留存。前三天的照片是重要的售后依据，若不提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞融合度低于80%，先将培养液转移至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养；若融合度超过80%，则可进行传代。传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS洗涤1-2次细胞。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放置于37℃孵箱消化1-2分钟，然后观察细胞状态。若细胞大多变圆并脱落，迅速轻击培养瓶，加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶培养（一般分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

b. 悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法处理，竖放培养瓶于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，补充3ml新完全培养基；若培养基变色较慢，可以直接加入500ul左右的FBS。通常传代3次后可进行离心传代，以去除死细胞。
2. 如需分瓶，使用离心换液法：将细胞悬液收集至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液重悬混匀，再按1:2比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新的完全培养基。

c. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变化，待细胞变圆后终止消化并轻轻使其脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1mlXPJ的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后置入冻存管中。
4. 将细胞冻存管直接放入-80℃冰箱存放，若后期需转入液氮罐，需在-80℃贮存24小时以上再转入液氮。

d. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护装备），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，使用5ml完全培养基重悬后接种至T25培养瓶，并置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 第二天，替换为新鲜的完全培养基继续培养。

注意事项

需注意部分细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是常见现象。如脱落数量较多，可将所有培养液收集至离心管中，于1000RPM下离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀加入1-2ml胰酶轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后终止反应。再进行离心、去除上清并重悬后，按1:2比例进行分瓶培养，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

选择XPJ，为您的细胞培养提供优质的保障与支持。