人结肠腺癌细胞LS1034培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代

传代情况：每2天更换培养液

备注：请用无菌离心管收集培养基，以便进行对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接选择XPJ的完全培养基。

二、细胞接收与处理

收到细胞后，培养至良好状态，灌满完全培养液，并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在处理前，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，并放置于超净台内严格进行无菌操作。将细胞瓶移入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。借助显微镜观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各拍摄一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则需进行以下传代步骤：

1. 弃去培养上清，使用不含钙镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS冲洗细胞一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩及变圆，加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞以确保其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，将细胞沉淀加入1mlXPJ无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，在37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
4. 第二天更换为新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在贴壁时不够牢固，在运输过程中出现细胞脱落是正常现象。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，以1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。重新加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最终放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件

出现以下情况可进行重新发货：

1. 运输过程中发生细胞丢失、瓶身破损或严重漏液等问题；
2. 细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果；
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰发货细胞复苏24小时后，若绝大多数细胞未存活（需提供图像证据）；
4. 其他合理条件下的细胞活性问题，需在7天内反馈并提供验证依据。

2）不予重发的情况

以下情况无法进行重发：

1. 客户造成的细胞污染；
2. 由于不正确操作导致细胞状态不佳；
3. 使用非推荐培养体系所引发的问题；
4. 未提供细胞培养前三天的照片；
5. 获取后的两天内未及时反馈；

基于以上免责声明，请确保在操作过程中遵循细胞培养原则，以确保您的研究顺利进行。选择XPJ，您的细胞培养首选品牌！